简述怎样使用厌氧培养系统(05/10更新)

厌氧培养——微生物厌氧培养
1．可利用厌氧产气袋法进行厌氧培养。
规格2.5L的产气袋只能将2.5L容积内的氧气完全吸收，转化成二氧化碳，同理，3,5L的产气袋能吸收3.5L容积的氧气。微需要产气袋和二氧化碳产气袋亦是如此，为达到相应的氧气浓度和二氧化碳浓度，不仅容积要固定，放置的培养物数量也基本要装满，在出厂前都根据计算设定好了的，所以，培养也需要在设定的条件下进行。
日本三菱的厌氧培养罐有两种规格：2.5L（13.5*19.7*9.5cm,容纳12只9cm标准培养皿），配套使用1只2.5L规格的厌氧产气袋；7.0L（21.3*28.0*11.2cm,容纳42只9cm标准培养皿），配套使用3只2.5L规格的厌氧产气袋或者2只3.5L的厌氧产气袋。两种都是长方体，原厂的产气袋培养后不会产生负压，直接可以打开，所以不需要泄压孔。
2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

怎样正确使用厌氧培养箱

1.按使用要求放置好必要的附件和器具；
2.通电源开照明灯，开温控仪，调节所需温度；
3.操作室内放入1000g钯粒（封闭）和500g干燥剂，并放入美兰指示纸（封闭）；
4.关紧取样室内外门，并抽真空校验；
5.操作室内第一次置换（氮气置换）：
A.把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧
B.接通氮气进气路，打开氮气控制阀1，使手套鼓起，关闭阀门1，然后扎紧袋口；
6.操作室第二次置换（氮气置换）重复一次充氮过程，取样室先抽真空，并注意随时用脚踏开关开闭排气。如此连续三次氮气置换。
7.操作室第四次置换（混合气体置换）：
（混合气体配比为N285%、H210%、CO25%）
A.调换气路打开混合气阀3进气，充气时取样室先抽真空，并随时用脚踏开关开闭排气；
B.关掉混合气体阀3，并打开阀5，使混合气体经过流量计，调整流量计，流量为每分钟10ml左右；
C.混合气体重复2-3次转换，经过上述过程，基本形成厌氧环境。
8.操作室内打开粑粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后打开美兰指示纸观察其变况，不变色为操作室内达到厌氧环境；
9.开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理，灭菌时间按具体实验自定。

厌氧培养箱的使用说明

1）按使用要求放置好必要的配件和器具、并向操作室内放入两个无毒塑料袋。
2）混合气瓶、氮气瓶输入压力调整，调节减压阀，使输入压力为0.1Mpa
3) 打开设备后配，电源开关后，按控制牌上的总电源键，使设备通电。
4）操作室放入1000g钯粒（密封），由冷凝系统除湿，并放入厌氧指示剂。
5）关紧取样室内外门，并抽真空校验。（按控制面牌上真空泵键，按一下开，再按一下关）
6）操作室内第一次置换（氮气置换）：
（1）先用橡皮管插入操作室内进气口，另一个插入塑料袋。
（2）接通氮气进气路，打开操作室氮气控制阀，使两只塑料袋充足氮气后，关闭电磁阀，然后扎紧袋口。
（3）把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧。
（4）把塑料袋内氮气渐渐的放于操作室内，至全部防除。
7）操作室第二次置换（氮气置换）重复一次冲氮过程，取样室先抽真空，并注意随时按排气阀关闭排气。
8）操作室第三次置换（混合气体置换） (混合气体配比为H2 1/85% H2 1/10% H2 1/10% CO2/15%）
（1）调换气路打开操作室混合气阀进气，冲气时取样室先抽真空，并注意随时按排气阀关闭排气。
（2）混合气充满塑料袋后，关闭电磁阀，并打开混合气限流阀，使混合气经过稳流器、流量计、调整流量计，流量为每分钟10毫升左右。
（3）把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内。
（4）通过三次换气后，操作室内气体含氧量已处于极为量状态
9）操作室内打开钯粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，并在厌氧指示条反应区上滴一点洁净水，1-2小时后，观察其变况，反应部分深蓝色变为浅蓝为操作室内达到厌氧环境。
10）紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理，灭菌时间自定。 1）检查取样室内门并关紧之。
2）打开取样室外门，将菌种放入取样室后即关上外们。
3）取样室充氮置换三次过程，先抽真空度500毫米汞柱（66Kpa)以上停，然后打开取样室氧气阀进气，使指针回复零位，关掉阀。取样室充氮置换三次过程结束。
4）如选定真空度较低就需要增加置换的次数。
5）取样室外门开启、关紧后，再抽低真空度100毫米汞柱（13Kpa）检验。
6）厌氧培养箱需要长期连续使用的条件
（1）每天在操作室内放入美兰指示条观察，如不能正常就必须重新换气。
（2）要长期连续输入微量的混合气体。使补进的氮气能和微量的氮结合通过催化吸收，保证了室内厌氧状态，补入混合气流量选定为每分钟10毫升左右。
（3）.连续培养运行一天，更换一次除氧剂和干燥剂。（换下的除氧剂和干燥剂可放在200℃干燥箱内，干燥2－3小时可使其复原）
7）接种棒灭菌器的应用：
（1）随时用镍烙电热丝使电极短路而变赤热以进行杀菌（接种棒）。
（2）熔蜡处可直接放上试管封蜡口旋转熔蜡。
8）操作室理的培养箱理的培养箱内的温度可任意选择和控制。 1．仪表尽可能地安装于空气清静，温度变化较小的地方。
2．开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的说明书、掌握正确的使用方法。
3．培养物放入必须是在操作室内达到绝对厌氧环境后放入。
4．如发生故障（停气等原因）操作室内仍可保持12小时厌氧状态。（超过12小时则根据需要把培养物取出另作处理）。
5．经常注意气路有无漏气现象。
6．调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体
7．真空泵按要求使用，定期检查加油。
8．停止使用，关闭总电源键，及设备后部的电源开关 现象 原理 处理 1、无电源 1、插头未插或短线 1、插好插头 2、熔断器开路 2、更换同型号熔丝管 3、电源开关坏 3、更换电源开关 2、培养箱不开盖 1、设定温度低 1、调整设定温度 2、探头坏 2、更探头 3、操作室、取样室漏气 1、密封不好 1、用肥皂水校漏后用704密封 2、年久橡皮圈老化 2、更换橡皮圈 4、气路不通 1、气阀坏 1、更换气阀 2、皮管漏气或脱落 2、更换专用皮管 3、气瓶气用完 3、更换气体 5、灯不亮 1、起辉器或灯不亮 1、更换起辉器或灯管 2、整流器烧坏 2、更换整流器

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